组胺类物质检查

    本试验按照《中华人民共和国药典》2020年版四部通则1146组胺类物质检查法进行。

    本法系比较组胺对照品（S）与供试品（T）引起豚鼠离体回肠收缩的程度，以判定供试品中所含组胺类物质的限度是否符合规定。

    对照品溶液的制备 精密称取磷酸组胺对照品适量，按组胺计算，加水溶解并定量稀释制成每1ml 中含1.0mg的溶液，分装于适宜的容器内，4～8℃ 贮存，在确保收缩活性符合要求的前提下，可在3个月内使用。

    对照品稀释液的制备  试验当日，精密量取组胺对照品溶液适量，用氯化钠注射液按高、低剂量组（d_S2、d_S1）配成两种浓度的稀释液，高剂量 d_S2，应不致使回肠收缩达到极限，低剂量 d_S1所致反应值约为高剂量的一半，调节剂量使反应可以重复出现。一般组胺对照品浴槽中的终浓度为10^-6~10^-9/ml，注入体积一般0.2～0.5ml为宜，高低剂量的比值（r）为1：0.5左右。调节剂量使低剂量能引起回肠收缩，高剂量不致使回肠收缩达极限，且高低剂量所致回肠的收缩有明显差别。

    供试品溶液的制备  按品种项下规定的限量，照对照品稀释液低剂量（d_S1）配成适当的浓度。试验时，一般供试品溶液与对照品稀释液的注入体积应相等。

    回肠肌营养液的制备  A 液∶试验当日，取氢化钠 160.0g、氯化钾 4.0g、氯化钙（按无水物计算）2.0g、氯化镁（按无水物计算）1.0g与磷酸氢二钠（含12 个结晶水）0.10g，加注射用水700ml使溶解，再加入注射用水适量、使成 1000ml。

    B 液：取硫酸阿托品0.5mg，碳酸氢钠1.0g、 葡萄糖（含1个结晶水）0.5g，加适量注射用水使溶解、加A液50.0ml，混合后加注射用水使成1000ml，调节pH值至7.2～7.4。B液应临用前制备。

    检查法  取健康合格的成年豚鼠，雌雄均可，雌者无孕，体重250~350g，禁食 24 小时，迅速处死。立即剖腹取出回肠一段（选用远端肠段，该段最敏感），注意避免因牵拉使回肠受损，仔细分离肠系膜。剪取2~3cm 长，用注射器抽取上述溶液 B，小心冲洗出肠段的内容物。将肠段下端固定于离体器官恒温水浴装置的浴槽底部，上端用线与记录装置相连；浴槽中事先放入定量的 B液（10~30ml），通入95%O₂和5%CO₂的混合气体，维持恒温（34~36℃），用适当方法记录回肠收缩幅度。如果使用杠杆，其长度应能使肠段的收缩放大约20倍。选择1g左右的预负荷，可根据其灵敏度加以调节。回肠放入浴槽后，静置15～30 分钟，方可开始注入药液。每次注入药液前，要用B液冲洗浴槽2~3次。相邻两次给药的间隔时间应—致（约 2 分钟），每次给药前应在前一次反应恢复稳定后进行。

    在上述高低剂量范围内选定对照品稀释液的剂量（d_S1、d_S2）和供试品溶液按品种项下规定的剂量（d_T），照下列次序准确注入浴槽6个剂量∶d_S2、d_S1，d_T、d_T、d_S1、d_S2。，如 d_S2所致的反应值大于d_S1所致的并且可重复时判断试验有效。如供试品溶液引起回肠收缩，分别将第二个剂量 d_S1与第四个剂量d_T、第五个剂量d_S1与第三个剂量 d_T 所致反应进行比较，若d_T所致反应值均不大于d_S1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查符合规定；若 d_T所致反应值均大于d_S1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查不符合规定。否则应另取动物按初试方法进行复试，复试结果若 d_T所致反应值均不大于d_S1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查符合规定；只要一个d_T 所致反应值大于d_S1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查不符合规定。如供试品不引起回肠收缩， 则按照限值剂量在供试品溶液中加入组胺对照品高、低剂量，并按下列次序准确注入d_S2、d_S1+T、 d_S2+T、d_S1，重复一次，若供试品组胺溶液产生的收缩与对应组胺对照液高、低剂量产生的收缩基本—致，可判定供试品组胺类物质检查符合规定；若供试品组胺溶液产生的收缩与对应组胺对照液高、低剂量产生的收缩不相符，即减少或无收缩或不能重复出现，则此试验结果无效，应另取动物重试。组胺类物质检查不能得到有效结果时可进行供试品的降压物质检查。